BMC cancer:殺傷腫瘤細胞!----一種非病毒mcDNA介導的雙特異性CAR T細胞

  肝細胞癌(HCC)是全球最常見的癌癥之一，其過繼性免疫療法值得研究。CD133是一種癌癥干細胞(CSC)抗原，與glypican-3(GPC3)一起已被證明在HCC細胞中高度表達，并且它們可作為作產生嵌合抗原受體(CAR)T細胞的靶標。但在CAR T細胞治療中存在“脫靶”毒性，存在低轉染療效和抗腫瘤能力弱等局限性。

  近段時間來自中國復旦大學附屬中山醫院的一個研究團隊針對一種非病毒mcDNA介導的雙特異性CAR T細胞進行了研究，旨在研究其抑制腫瘤增殖能力。

  本研究從健康供體獲得外周血，通過密度梯度離心分離T細胞。研究人員使用電穿孔系統將抗CD133和抗GPC3單鏈片段變量(scFv)結構作為靶基因遞送到T細胞中。細胞膜由瞬時電流效應打開，靶基因通過非病毒微圓DNA(mcDNA)載體遞送到細胞中。采用流式細胞術和蛋白質印跡法檢測兩種scFv是否同時轉染以及該雙特異性CAR-T細胞生成方法的轉染功效。再通過CCK-8測定和HCC異種移植小鼠模型分別檢測了CAR T細胞的體外和體內腫瘤抑制功效。同時含有CD133和GPC3抗原識別位點的CoG133-CAR T細胞是效應細胞。CD133-CAR T細胞和GPC3-CAR T細胞定義為單靶向對照組，正常T和模擬T細胞定義為空白對照組。

  mcDNA載體適應兩個成功轉染的靶基因結構以產生雙特異性CAR T細胞?；蛩胶偷鞍踪|水平的檢測方法證實，CoG133-CAR T細胞具有較強的轉染效率，并表現出CD133和GPC3的抗原結合能力。與單靶點CAR T細胞或對照T細胞相比，CoG133-CAR T細胞在體外對CD133和GPC3雙陽性HCC細胞系和體內HCC異種移植小鼠具有增強的消除功效。蘇木精和曙紅(H&E)染色表明CoG133-CAR T細胞和主要器官上不存在致命的“脫靶”組合。

  該研究表明，通過非病毒mcDNA載體制備雙特異性CAR T細胞具有更高的效率和安全性。CoG133-CAR T細胞通過雙重抗原識別和內部激活增強腫瘤抑制能力。它為肝細胞癌(甚至是實體瘤)的CAR-T治療提供了一種創新策略。

  原始出處：Wang H, Wang X, et al. Nonviral mcDNA-mediated bispecific CAR T cells kill tumor cells in an experimental mouse model of hepatocellular carcinoma. BMC Cancer. 2022 Jul 25;22(1):814. doi: 10.1186/s12885-022-09861-1. PMID: 35879685; PMCID: PMC9310485.

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